研究基因的表達與功能時，科研工作者首先需要將外源DNA導入細胞/組織中。DNA的體內外遞送需要用到運輸工具-載體，而質粒和病毒是兩種常用的基因遞送載體。通過將目的基因克隆至相應的表達載體，利用細胞轉染或者病毒感染的方式實現外源基因的過表達。外源基因的過表達效果如何是科研工作者非常關心的問題。維真生物可以采用常規分子生物學技術揭示結果。
維真生物可為客戶提供基因轉錄水平和翻譯水平的基因表達檢測服務，具體信息詳見下表；
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服務編號 |
服務類型 |
規格 |
目錄價 |
貨期 |
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WZ080001 |
mRNA檢測 |
實時定量PCR |
詢價 |
咨詢 |
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WZ080002 |
蛋白質檢測 |
Western blot |
詢價 |
咨詢 |
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相關服務： 分子克隆 腺病毒包裝 慢病毒包裝 腺相關病毒包裝 穩定細胞株建立
實時定量PCR是定量分析mRNA最通用、最快速和最簡便的方法。該方法利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對待測樣品進行定量分析，具有很高的靈敏性和特異性。目前，實時定量PCR常用的為熒光染料嵌合法(SYBR Green)和熒光探針法。其中，熒光染料嵌合法(SYBR Green)是最經濟、最簡便的，它利用熒光染料(SYBR Green)與雙鏈DNA分子結合發光的特性，指示PCR擴增產物的增加，從而揭示基因轉錄水平的表達特征。
Western blot，也稱免疫印跡，是利用抗原與抗體特異性結合的原理檢測外源基因表達的特異蛋白質。經過PAGE膠分離的蛋白質樣品，轉移到固相支持物（如硝酸纖維素膜、PVDF膜）上，固相支持物以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相支持物上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的二抗起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異目的基因表達的蛋白質。該技術被廣泛應用于定性和半定量分析蛋白表達水平，從而揭示基因翻譯水平的表達特征。
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| Step 1 | 通過查看測序結果檢查重組質粒構建是否正確。 |
| Step 2 | 實時定量PCR驗證基因是否成功轉錄。 |
| Step 3 | Western Blot檢測蛋白是否成功過表達。 |
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通過以上3步排查法，鎖定問題所在，針對性地解決問題。 通常，標簽的使用、制備質粒的質量、抗體的有效性、蛋白的壽命、特殊類型的蛋白和基因序列的復雜性均會影響好的實驗結果。另外，實驗時對照組的設置也是非常關鍵的，合理的對照可以幫助科研工作者得到完美的實驗結果，一旦出現問題，也便于科研工作者快速找到問題所在。 |
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