久久久国产精品无码一区二区三|亚洲欧美日韩国产另类综合|无码国模国产在线观看免费91|日韩国产在线激情不卡二区|欧洲中文字母久久-星影控站

雙熒光素酶報告基因檢測服務

熒光素酶（luciferase）是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統稱，可以催化熒光素氧化成氧化熒光素，在氧化過程中發出生物熒光。熒光素酶以出色的靈敏度、使用方便、可定量檢測成為理想的報告基因。熒光素酶的種類很多，其中應用較為廣泛的是螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase，FLUC）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase，RLUC）。

雙熒光素酶催化發光原理

■ 螢火蟲熒光素酶是一個61kD的單體酶，不需要表達后修飾即可獲得酶活性，其催化的發光反應必須要有ATP和熒光素的參與，在ATP、Mg²⁺和O₂存在的條件下，熒(ying)(ying)光素(su)(su)在熒(ying)(ying)光素(su)(su)酶(mei)的催(cui)化下氧化產(chan)生黃綠光，波長540-600nm。

■ 海腎熒光素酶是一個36kD的單體酶，同樣不需要表達后修飾即可產生酶活性，只需要O₂即(ji)可(ke)催化腔腸素氧化發出藍光(guang)，波長(chang)460-540nm。

雙熒光素酶報告基因系統

由于螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的催化底物和發光顏色不同，且光吸收波長不同，可在互不干擾的情況下進行檢測，此外，在哺乳動物體內兩種酶均無內源性表達，因此作為雙熒光素酶報告基因系統得到廣泛使用。在雙熒光素酶檢測中，通常(chang)以螢火蟲熒光素酶為實驗(yan)報告基(ji)因，以海腎熒光素酶為對(dui)照報告基(ji)因，以減少(shao)細胞(bao)活性、轉染效率等外在變化因素對(dui)實驗(yan)準確性的影(ying)響。

1、檢測方法

將(jiang)螢火蟲熒(ying)(ying)(ying)光素(su)(su)酶(mei)(mei)(mei)報(bao)告基因(yin)質粒與帶有(you)海腎熒(ying)(ying)(ying)光素(su)(su)酶(mei)(mei)(mei)基因(yin)的(de)質粒共(gong)轉(zhuan)染細胞，或者(zhe)將(jiang)兩種報(bao)告基因(yin)構(gou)建到同(tong)一載體上(shang)，用不同(tong)的(de)啟(qi)(qi)動子啟(qi)(qi)動其(qi)表(biao)達，通(tong)過計算螢火蟲熒(ying)(ying)(ying)光素(su)(su)酶(mei)(mei)(mei)檢測(ce)值與海腎熒(ying)(ying)(ying)光素(su)(su)酶(mei)(mei)(mei)檢測(ce)值的(de)比值（Firefly Luciferase/ Renilla Luciferase），分(fen)析熒(ying)(ying)(ying)光素(su)(su)酶(mei)(mei)(mei)的(de)表(biao)達水平。

2、應用場景

雙熒光素酶報(bao)告基因系統憑借靈敏度高、檢測(ce)范(fan)圍廣、方便(bian)快速(su)的(de)(de)優勢，已成為基因轉錄調控(kong)、啟動(dong)子結構分(fen)析(xi)、啟動(dong)子SNP分(fen)析(xi)和非(fei)編碼RNA靶向互作(zuo)等(deng)研究的(de)(de)重要手段。

★維真生物雙熒光素酶檢測服務★

服務內容一：啟動子與轉錄因子互作檢測

將靶(ba)啟動(dong)子片段插(cha)入到螢火(huo)蟲(chong)熒(ying)光(guang)素酶(mei)表(biao)達(da)序列上(shang)游，構建(jian)實(shi)驗報(bao)告基(ji)因(yin)(yin)質粒(li)，將要檢測的(de)轉錄因(yin)(yin)子表(biao)達(da)質粒(li)與兩(liang)種(zhong)報(bao)告基(ji)因(yin)(yin)質粒(li)共轉染相關(guan)細(xi)(xi)胞；經細(xi)(xi)胞培養后(hou)裂解細(xi)(xi)胞，離(li)心取上(shang)清，隨后(hou)分(fen)別加(jia)入兩(liang)種(zhong)熒(ying)光(guang)素酶(mei)底物(wu)，熒(ying)光(guang)素酶(mei)與底物(wu)反應產生熒(ying)光(guang)，通過檢測熒(ying)光(guang)的(de)強度測定(ding)熒(ying)光(guang)素酶(mei)的(de)活性(xing)，從而判斷轉錄因(yin)(yin)子是否與該啟動(dong)子存在相互(hu)作用。

備注：如果轉錄因子能夠激活靶啟動子，則螢火蟲熒光素酶基因就會表達，且螢火蟲熒光素酶的表達水平與轉錄因子的作用強度成正比。

啟動子與轉錄因子互作檢測示意圖

相關載體：

服務內容二：miRNA-靶基因調控驗證

miRNA通(tong)過識別(bie)mRNA的(de)3’UTR區(qu)，誘導(dao)細(xi)胞內沉默復合體介導(dao)的(de)mRNA降解或抑制mRNA的(de)翻譯過程。將(jiang)野生型或突變型待測靶基(ji)因(yin)的(de)3’UTR序列構建至(zhi)螢(ying)火蟲(chong)(chong)熒光素酶(mei)基(ji)因(yin)的(de)3’端，將(jiang)兩(liang)個報告基(ji)因(yin)質粒與miRNA在細(xi)胞內共表(biao)(biao)達，通(tong)過比較螢(ying)火蟲(chong)(chong)熒光素酶(mei)報告基(ji)因(yin)表(biao)(biao)達活性的(de)改變，驗證(zheng)miRNA對靶基(ji)因(yin)的(de)調控作用(yong)。

備注：若螢光素酶的活性降低，提示miRNA可能參與抑制靶基因的表達。

miRNA與靶基因調控驗證示意圖

相關載體：

服務流程：

啟動子與轉錄因子互作檢測

miRNA與靶基因調控驗證