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DD/Shield1系統,實現蛋白可逆表達





1. DD是什么?


 “不穩定結構域”(destabilizing domains,DD),是FK506-雷帕霉素結合蛋白FKBP突變體L106P,大小12kD。當它與其它蛋白融合后,會由泛素-蛋白酶體系統介導被快速組成型降解。而當加入細胞滲透性、能特異結合DD的小分子配體Shield1時,融合蛋白不再被降解,目的蛋白恢復行使正常的細胞功能,并且呈現可逆與劑量依賴性。因此,DD-Shield1系統能可逆控制蛋白表達,也正是因為這一點,被認定是一項有前途的技術正得到廣泛關注。



2. DD和Shield1的關系?


 簡單來說,DD作為一個小型不穩定蛋白與其他蛋白融合后,融合蛋白則被降解,Shield1則能抑制其降解,恢復融合蛋白的表達及生物學功能。



3. 生物學意義:


 利用蛋白穩定性的藥物誘導表達系統(DD-Shield1系統)在活體內和體外使某一基因可逆表達,利用這一系統可使因蛋白失活而表型改變的細胞或活體表型得到部分或全部恢復,這為細胞和活體生物嚴謹調控蛋白功能提供了一種新的策略。

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4.DD-Shield1系統優勢:


快速: 在細胞水平上,Shield1可在15-30 min內快速調節蛋白表達量,相反,在去除Shield1后,蛋白降解的半衰期可縮短至30分鐘;比轉錄開關機制或RNAi技術速度更快。


精確: DD-Shield1系統可以直接靶定蛋白,,通過調節Shield1濃度,可以精確調控融合蛋白的表達量;


可逆: 它可通過配體濃度變化可逆調控蛋白表達水平,彌補了其他條件性控制蛋白表達的不足,如Cre-loxP系統和四環素系統所造成的干擾是不可逆的;



5.維真DD-Shield1系統相關服務:


服務內容: 維真可將不穩定結構域DD連接在您想要表達的蛋白之前,構建融合蛋白表達載體,協助您研究蛋白可逆表達給細胞或者動物所帶來的生物學影響。


技術支持:


① DD誘導GFP蛋白的降解


GFP對照

DD-gfp對照


 分析:將GFP單獨表達的質粒與DD-GFP融合表達的質粒分別轉染293細胞,發現融合不穩定蛋白DD后,GFP表達明顯降低;

說明,DD誘導了GFP蛋白的降解;



② shield1可完全或者部分恢復GFP的表達


DD-gfp

Shield1

(-)

+(24h)

+(48h)


 分析:與無配體處理的細胞相比,加入Shield1 配體(1μM)后,細胞中GFP恢復表達,且呈現一定的時間依賴性。

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