久久久国产精品无码一区二区三|亚洲欧美日韩国产另类综合|无码国模国产在线观看免费91|日韩国产在线激情不卡二区|欧洲中文字母久久-星影控站

四環素表達調控系統

 1992年Goseen等人成功的利用原核基因調控元件構建了四環素（tetracycline,Tet）真核細胞基因調控表達系統。目前，此系統已被廣泛應用于基因功能和基因治療領域的研究。

1.四環素調控表達系統的基本原理

 Tet調控表達系統通過誘導藥物（如四環素和強力霉素等）改變調控蛋白的構象，從而達到調控目標蛋白表達的目的。

 Tet調控基因表達系統是以大腸桿菌Tn10轉座子上Tet抗性操縱子為基礎而建立的。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）與Tet操縱子（Tet operator, TetO）能夠特異性結合。當無誘導藥物存在時，TetR會與TetO結合，從而阻斷下游耐藥基因的表達；當有誘導藥物存在時，TetR的構象會發生改變，并從TetO上脫離下來，使下游耐藥基因得以表達，細菌從而獲得耐藥性。

2. Tet-on調控系統

 利用TetR和TetO特異性結合的特點，多種類型的Tet調控系統逐漸發展起來。其中，應用較廣泛的為Tet-on激活型系統。

 Tet-on系統由調節表達載體和反應表達載體組成。調節表達載體包含一個人巨細胞病毒早期啟動子（PhCMV）和反義Tet轉錄活化因子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其中rtTA由反義TetR（reverse TetR, rTetR）和單純皰疹病毒（HSV）VP16 蛋白C端的一段轉錄激活區域融合而成。反應表達載體由Tet應答元件（Tet-responsive element, TRE）、CMV啟動子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目的基因組成。其中TRE是7個重復的TetO序列。

Tet-on原理:

 rtTA是由tTA突變4個氨基酸形成，它的表型與tTA相反。生理條件下，rtTA與TRE不結合，由于PminCMV缺少增強子，因此目的基因不表達；給于DOX后，DOX與rtTA的結合體與TRE結合，從而啟動基因表達。

Tet-off原理:

 Tet轉錄活化因子(tetracycline transcriptional activator, tTA)是由TetR的1-207個氨基酸和單純皰疹病毒VP16激活結構域的C端127個氨基酸組成。VP16的增加使得TetR由轉錄抑制因子變為轉錄激活因子。生理條件下，tTA主動與TRE結合，啟動基因表達；若給于DOX后，DOX與tTA的結合體與TRE解離，從而抑制基因表達。

3. Tet-on調控系統的優勢

Tet-on調控系統集高效率、精準、安全、可逆性四大特點。

4. 維真Tet-on/off服務項目

 Tet-on表達調控系統是當前應用更為廣泛的四環素調控系統，所以下面小V將以Tet-on為例對維真可做的服務項目進行簡單介紹。

 維真生物現有多種Tet-on表達調控載體，并能根據客戶需要包裝成teton的腺病毒、慢病毒和腺相關病毒。目前維真使用的是第三代技術（TRE3G）。第三代技術相比于前兩代技術來說，背景更低，藥物敏感度也更高。