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四環素表達調控系統

1992年Goseen等人成(cheng)功(gong)的利用(yong)原核基因(yin)調控元件構建了四環素（tetracycline,Tet）真(zhen)核細胞基因(yin)調控表達(da)系(xi)(xi)統。目前，此系(xi)(xi)統已(yi)被廣泛應用(yong)于基因(yin)功(gong)能(neng)和基因(yin)治療(liao)領域的研究。

1.四(si)環素調(diao)控表達系(xi)統的(de)基本原理(li)

Tet調(diao)控(kong)表達(da)(da)系統通過誘導藥(yao)物（如四環素和強力霉素等(deng)）改變(bian)調(diao)控(kong)蛋白(bai)的(de)構象，從而達(da)(da)到調(diao)控(kong)目(mu)標蛋白(bai)表達(da)(da)的(de)目(mu)的(de)。

Tet調(diao)控基(ji)因(yin)表(biao)(biao)達(da)系統是以大腸桿菌Tn10轉座(zuo)子上Tet抗(kang)性操縱子為基(ji)礎而(er)建(jian)立(li)的(de)(de)。Tet阻遏蛋(dan)白（Tet repressor protein, TetR）與Tet操縱子（Tet operator, TetO）能夠特異性結合(he)。當(dang)無誘(you)導藥物(wu)存在(zai)時，TetR會與TetO結合(he)，從(cong)而(er)阻斷(duan)下(xia)(xia)游(you)耐藥基(ji)因(yin)的(de)(de)表(biao)(biao)達(da)；當(dang)有誘(you)導藥物(wu)存在(zai)時，TetR的(de)(de)構象會發生(sheng)改變，并從(cong)TetO上脫離下(xia)(xia)來，使(shi)下(xia)(xia)游(you)耐藥基(ji)因(yin)得(de)以表(biao)(biao)達(da)，細菌從(cong)而(er)獲得(de)耐藥性。

2. Tet-on調控系統

利用TetR和TetO特異性(xing)結合的特點，多(duo)種類型的Tet調控系(xi)(xi)統(tong)逐漸(jian)發展(zhan)起來。其中，應用較廣泛的為Tet-on激活型系(xi)(xi)統(tong)。

Tet-on系統由(you)調節(jie)表達(da)載(zai)體(ti)(ti)(ti)和(he)反(fan)應(ying)表達(da)載(zai)體(ti)(ti)(ti)組成(cheng)(cheng)。調節(jie)表達(da)載(zai)體(ti)(ti)(ti)包含一(yi)個人巨(ju)細胞病毒早期啟動子（PhCMV）和(he)反(fan)義(yi)Tet轉(zhuan)(zhuan)錄(lu)活化因(yin)子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其(qi)中(zhong)(zhong)rtTA由(you)反(fan)義(yi)TetR（reverse TetR, rTetR）和(he)單(dan)純皰疹病毒（HSV）VP16 蛋白C端的(de)一(yi)段轉(zhuan)(zhuan)錄(lu)激活區域融合而成(cheng)(cheng)。反(fan)應(ying)表達(da)載(zai)體(ti)(ti)(ti)由(you)Tet應(ying)答元(yuan)件（Tet-responsive element, TRE）、CMV啟動子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目(mu)的(de)基(ji)因(yin)組成(cheng)(cheng)。其(qi)中(zhong)(zhong)TRE是7個重(zhong)復的(de)TetO序列。

Tet-on原理(li):

rtTA是(shi)由tTA突變4個氨基酸(suan)形成，它的(de)表型(xing)與(yu)tTA相反。生理條件下，rtTA與(yu)TRE不(bu)結(jie)(jie)合(he)，由于(yu)PminCMV缺(que)少增強子，因此目的(de)基因不(bu)表達(da)(da)；給于(yu)DOX后，DOX與(yu)rtTA的(de)結(jie)(jie)合(he)體與(yu)TRE結(jie)(jie)合(he)，從而啟動(dong)基因表達(da)(da)。

Tet-off原(yuan)理(li):

Tet轉錄活化因(yin)子(zi)(tetracycline transcriptional activator, tTA)是由TetR的(de)1-207個氨(an)基(ji)酸(suan)和(he)單(dan)純皰(pao)疹(zhen)病毒VP16激活結(jie)(jie)構域的(de)C端127個氨(an)基(ji)酸(suan)組成。VP16的(de)增加使得TetR由轉錄抑制因(yin)子(zi)變(bian)為轉錄激活因(yin)子(zi)。生理(li)條件(jian)下，tTA主動(dong)與(yu)TRE結(jie)(jie)合，啟動(dong)基(ji)因(yin)表達；若給于DOX后，DOX與(yu)tTA的(de)結(jie)(jie)合體與(yu)TRE解(jie)離，從而抑制基(ji)因(yin)表達。

3. Tet-on調控系統的優勢

Tet-on調控系統集高效率(lv)、精準、安全、可(ke)逆性四大特點。

4. 維(wei)真Tet-on/off服務項(xiang)目

Tet-on表達調控(kong)系(xi)統是當前應用更為廣泛(fan)的四環素(su)調控(kong)系(xi)統，所以下面小V將以Tet-on為例對維真可做(zuo)的服務項目(mu)進行簡單介紹。

維真生物現有多種Tet-on表達(da)調控載(zai)體(ti)，并能(neng)根據客戶需要包裝成(cheng)teton的(de)腺病(bing)毒(du)、慢(man)病(bing)毒(du)和腺相(xiang)關(guan)病(bing)毒(du)。目前(qian)維真使用的(de)是第三代技(ji)術(shu)（TRE3G）。第三代技(ji)術(shu)相(xiang)比(bi)于(yu)前(qian)兩代技(ji)術(shu)來說，背景更(geng)低，藥物敏感度也更(geng)高。