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 關于Vector-based shRNAs，為了滿足廣大科研工作者不同的實驗需求，維真生物可以提供多種shRNA質粒構建服務：

單個shRNA載體構建，客戶提供高效siRNA靶點，維真生物公司根據靶點構建shRNA質粒。

套餐shRNA質粒構建，維真生物根據客戶提供的靶基因信息構建3保1或者4保1 shRNA質粒。

多和1 shRNA載體構建^特色1，維真生物根據客戶提供的高效siRNA靶點和靶基因信息構建多和1 shRNA質粒。

 以4 in 1 shRNA為例：該服務是將4條shRNA序列克隆至1個shRNA質粒。維真生物的4 in 1 shRNA質粒不僅可以用于轉染細胞，也可包裝成病毒用于病毒導入宿主。

4 in 1 shRNA下調GFP表達	4 in 1 shRNA下調RCAN1表達

 1）將4個作用于同一基因不同mRNA部位的shRNA序列克隆進同一shRNA載體，增加了目的基因下調表達的概率。

 2）將高效的、作用于2-4個靶基因的shRNA序列克隆進同一shRNA載體，實現2-4個基因同時下調表達的目的。

3）無需序列篩選，大大減少實驗工作量。

 4）多種4 in 1 shRNA病毒載體的選擇，包括腺病毒穿梭載體、慢病毒載體和腺相關病毒載體，實現不同的實驗目的。

針對同一目的基因的4條shRNA序列，不能具體確定哪條shRNA序列的干擾效果最好。

mir30-based shRNA質粒構建^特色2，實現組織特異性基因沉默。

 shRNA的RNAi機制與microRNA成熟機制一樣，因此，shRNA也可以由聚合酶II型啟動子驅動表達。這類啟動子包括廣譜啟動子(如CMV、CAG和EF1a等)和組織特異性啟動子(如hSyn、TBG和cTnT等)，可以啟動較大的基因轉錄，且需要polyA等轉錄終止信號。維真生物可以根據客戶指定的啟動子和提供的shRNA序列將其構建至mir30-based shRNA質粒。mir30-based shRNA結構示意圖如下：

誘導性shRNA質粒構建^特色3，包括Cre/loxp，Flp/Frt和Tet on等誘導系統。

 以Cre on shRNA為例，該服務是使用FLEX(flip-excision)系統實現shRNA誘導表達。FLEX是一種非常強大的控制基因表達的方法，它采用2對異質、反向的loxp位點(loxP和lox2272)，經過DNA翻轉產生帶有不同loxp位點的DNA翻轉，防止進一步的DNA翻轉，實現目標基因不可逆的翻轉。維真生物采用改良版FLEX，將2對異質、反向的loxp位點置于啟動子兩邊，通過cre作用決定啟動子方向，通過不同熒光蛋白可視化shRNA的表達。

1. 維真生物載體的啟動子是哪些？

維真生物載體使用兩類啟動子：人源的U6啟動子和H1啟動子。

2. 人源的U6啟動子和H1啟動子是否可以應用于大鼠、小鼠或其他哺乳動物細胞中？

可以的。人源的U6啟動子和H1啟動子之間沒有物種差別。這些啟動子在大鼠、小鼠或其他哺乳動物細胞中的啟動效率也非常好。

3. 你們保證siRNA干擾載體的效果嗎？

 如果針對一條被干擾的基因設計三條或四條shRNA，維真生物承諾在客戶細胞轉染效率達80%以上的條件下，如果3個或者4個靶點shRNA沒有任何一個對靶基因的抑制效率在mRNA水平上達到70%以上，公司將免費重新設計并構建4個新的shRNA質粒，需要增加一個實驗周期。若重新構建的shRNA載體仍然沒有任何一個對靶基因mRNA的抑制效率能夠達到70%，可能和該基因有關，公司僅收取客戶單次shRNA載體構建費用。

4. 針對一條被干擾的基因，你們建議訂購幾個干擾載體？

針對一條被干擾的基因，我們建議至少構建3個干擾載體。

5.我如何監控轉染效率？

您可以采用維真生物帶有GFP標記的shRNA載體直接地監控轉染效率。

6. 維真生物能夠利用來自其它公司的載體構建vector-based shRNA載體嗎？

可以，不過需要您提供給我們載體。

7. Vector-based shRNA的交付周期為多久？

交付周期為2-3周。

8. 使用病毒感染細胞的優勢是什么？

 病毒介導的shRNA可以克服一些由于靶細胞影響RNAi的問題，如原代細胞、成纖維細胞和樹突狀細胞等，這些細胞的轉染效率低。